Spectrophotometry – Phần 3

Các ứng dụng trong hóa sinh Phổ là một kỹ thuật quan trọng được sử dụng trong nhiều thí nghiệm sinh hóa đó liên quan đến DNA, RNA, và cô lập protein, động học enzyme và phân tích sinh hóa . Một lời giải thích ngắn gọn về các thủ tục pháp quang phổ bao gồm so sánh độ thấm hút của que mẫu trống không chứa một hợp chất màu để một que mẫu chứa một hợp chất màu. màu này có thể được thực hiện bằng cách hoặc là một thuốc nhuộm như Coomasie Brilliant Blue G-250 nhuộm hoặc bằng một phản ứng enzyme như đã thấy giữa ONPG và β-galactosidase (mẫu chuyển sang màu vàng).  Các quang phổ được sử dụng để đo lường chất màu trong vùng ánh sáng nhìn thấy (giữa 350 nm và 800 nm),  Do đó nó có thể được sử dụng để tìm thêm thông tin về các chất được nghiên cứu. Trong các thí nghiệm sinh hóa, các hóa chất và / hoặc vật lý tài sản được lựa chọn và sử dụng các thủ tục cụ thể đó là que tài sản để lấy thêm thông tin về mẫu, chẳng hạn như số lượng, độ tinh khiết, hoạt động của enzyme, vv Phổ có thể được sử dụng cho một số kỹ thuật như Xác định bước sóng hấp thụ tối ưu của mẫu, Xác định tối ưu pH là độ hấp thụ của mẫu, Xác định nồng độ của mẫu chưa biết, và Xác định pKa của các mẫu khác nhau . Phổ Quang cũng là một thủ tục hữu ích để làm sạch protein và cũng có thể được sử dụng để tạo ra các phép thử quang học của một hợp chất. dữ liệu quang phổ Cũng có thể được sử dụng kết hợp với Beer-Lambert Equation, A = OD = -log10T = εcl, nhằm xác định các mối quan hệ khác nhau giữa nồng độ và độ truyền, và độ hấp thụ và nồng độ . Bởi vì bước sóng của quang phổ đo chất thông qua màu sắc của nó, các chất gắn thuốc nhuộm có thể được thêm vào để que nó có thể trải qua một sự thay đổi màu sắc và được đo . Máy đo quang phổ đã được phát triển và cải tiến qua nhiều thập kỷ và đã được sử dụng rộng rãi trong các nhà hóa học. Ngoài ra, máy đo quang phổ được dùng để đo các giá trị hấp thụ bước sóng ánh sáng UV hoặc Visible . Nó được coi là một dụng cụ rất chính xác rất nhạy cảm và do đó rất chính xác, đặc biệt là trong việc xác định sự thay đổi màu sắc.  Phương pháp này cũng thuận tiện cho việc sử dụng trong các thí nghiệm trong phòng thí nghiệm bởi vì nó là một quy trình không tốn kém và tương đối đơn giản.

Quang phổ quang phổ nhìn thấy được UV 

Bài chi tiết: quang phổ nhìn thấy được tia cực tím
Phổ quang phổ phổ biến nhất được sử dụng trong các vùng UV và nhìn thấy được của phổ, và một số dụng cụ này cũng hoạt động trong vùng gần hồng ngoại.

Quang phổ nhìn thấy tia cực tím (UV-vis) liên quan đến các mức năng lượng kích thích chuyển tiếp điện tử. Năng lượng của ánh sáng ở 400 nm là ~ 250 kjoules / mol (~ 60 kcal / mol), nào là các thứ tự của các năng lượng của liên kết hóa học. Sự hấp thụ tia cực tím kích thích các electron nằm trong quỹ đạo của mặt đất tới các orbital phân tử kích thích của chúng 

Quang phổ quang phổ 400-700 nơ-ron được sử dụng rộng rãi trong khoa học đo màu. Đó là một thực tế được biết rằng nó hoạt động tốt nhất trong khoảng 0.2-0.8 O.D. Các nhà sản xuất mực in, các công ty in, các nhà cung cấp hàng dệt, và nhiều hơn nữa, cần dữ liệu được cung cấp qua phương pháp đo màu. Họ lấy các bài đọc ở khu vực từ 5 đến 20 nanomét dọc theo khu vực có thể nhìn thấy và tạo ra một đường cong phản xạ quang phổ hoặc một luồng dữ liệu cho các bài thuyết trình thay thế. Những đường cong này có thể được sử dụng để kiểm tra một đợt mới của chất màu để kiểm tra xem nó có phù hợp với các thông số kỹ thuật, ví dụ như tiêu chuẩn in ISO.

Phổ quang kế khu vực truyền thống có thể nhìn thấy không thể phát hiện nếu chất màu hoặc vật liệu cơ bản có huỳnh quang. Điều này có thể gây khó khăn cho việc quản lý các vấn đề về màu sắc nếu một hoặc nhiều mực in đang huỳnh quang. Trường hợp một chất màu có chứa huỳnh quang, một phổ quang phổ huỳnh quang được sử dụng quang phổ. Có hai thiết lập chính cho phổ quang phổ quang phổ, d / 8 (hình cầu) và 0/45. Tên là do hình học của nguồn sáng, quan sát và nội thất của buồng đo. Các nhà khoa học sử dụng dụng cụ này để đo lượng các hợp chất trong một mẫu. Nếu hợp chất tập trung hơn, nó sẽ được hấp thụ bởi mẫu; Trong phạm vi nhỏ, luật Beer-Lambert giữ và sự hấp thụ giữa các mẫu khác nhau với nồng độ tuyến tính. Trong trường hợp in ấn đo lường hai thiết lập khác thường được sử dụng-không có / với bộ lọc uv để kiểm soát hiệu quả của uv brighteners trong cổ phiếu giấy.

Các mẫu thường được chuẩn bị trong cuvettes; Tùy thuộc vào khu vực quan tâm, chúng có thể được xây dựng bằng thủy tinh, nhựa (vùng quang phổ nhìn thấy được quan tâm), hoặc thạch anh (vùng phổ phổ UV phổ hấp dẫn).