Quang phổ huỳnh quang (còn gọi là fluorometry hoặc spectrofluorometry) là một loại quang phổ điện từ phân tích huỳnh quang từ một mẫu. Nó bao gồm việc sử dụng một chùm ánh sáng, thường là ánh sáng cực tím, kích thích các electron trong các phân tử của một số hợp chất nhất định và khiến chúng phát ra ánh sáng; Thông thường, nhưng không nhất thiết, có thể nhìn thấy ánh sáng. Một kỹ thuật bổ sung là quang phổ hấp thụ. Trong trường hợp đặc biệt của quang phổ huỳnh quang một phân tử đơn, sự dao động cường độ từ ánh sáng phát ra được đo từ các fluorophores, hoặc các cặp fluorophores.
Các thiết bị đo huỳnh quang được gọi là fluorometers.
Lý thuyết
Các phân tử có nhiều trạng thái gọi là mức năng lượng. Quang phổ huỳnh quang chủ yếu liên quan đến các trạng thái điện tử và dao động. Nhìn chung, các loài đang được kiểm tra có một trạng thái điện tử mặt đất (trạng thái năng lượng thấp), và một trạng thái điện tử kích thích có năng lượng cao hơn. Trong mỗi trạng thái điện tử này có nhiều trạng thái rung động khác nhau.
Trong huỳnh quang, các loài đầu tiên được kích thích, bằng cách hấp thụ một photon từ trạng thái cơ bản điện tử của mình cho một trong những trạng thái dao động khác nhau trong trạng thái điện tử phấn khởi. Va chạm với các phân tử khác gây ra các phân tử kích thích để mất năng lượng rung động cho đến khi nó là trạng thái rung động thấp nhất của trạng thái điện tử kích thích. Quá trình này thường được hình dung bằng sơ đồ Jablonski
Phân tử này sau đó giảm xuống một mức độ rung động khác nhau của trạng thái điện tử trở lại, phát ra một photon trong quá trình này. Các phân tử có thể rơi xuống bất kỳ mức độ rung động nào trong trạng thái cơ bản, các photon phát ra sẽ có năng lượng khác nhau, và do đó tần số. Do đó, bằng cách phân tích các tần số khác nhau của ánh sáng phát ra trong quang phổ huỳnh quang, cùng với cường độ tương đối của họ, cấu trúc của các cấp độ rung động khác nhau có thể được xác định.
Đối với các loài nguyên tử, quá trình này tương tự; Tuy nhiên, vì các nguyên tử không có mức năng lượng rung động, các photon phát xạ thường ở cùng một bước sóng như bức xạ tới. Quá trình này tái phát photon bị hấp thụ là “huỳnh quang cộng hưởng” và trong khi nó là đặc trưng của huỳnh quang nguyên tử, phân tử huỳnh quang được nhìn thấy trong giếng.
Trong một phép đo huỳnh quang thông thường (khí thải), bước sóng kích thích là cố định và các bước sóng phát hiện khác nhau, trong khi huỳnh quang trong việc phát hiện bước sóng kích thích đo lường là cố định và các bước sóng kích thích là khác nhau giữa các khu vực quan tâm. Một bản đồ phát xạ được đo bằng cách ghi lại phổ phát xạ kết quả từ một loạt các bước sóng kích thích và kết hợp tất cả chúng với nhau. Đây là một bề mặt ba chiều tập hợp dữ liệu: cường độ phát xạ là một hàm của kích thích và phát bước sóng, và thường được miêu tả như một bản đồ đường viền.