Chuẩn bị đĩa
Các tấm TLC thường có sẵn trên thị trường với kích thước hạt tiêu chuẩn để cải thiện khả năng tái sản xuất. Chúng được chuẩn bị bằng cách trộn các chất hấp phụ, ví dụ như silica gel, với một số lượng nhỏ các chất kết dính trơ như canxi sulfat (thạch cao) và nước. Hỗn hợp này được trải rộng như một bùn dày trên một tấm vận chuyển không phản ứng, thường là thủy tinh, lá nhôm dày, hoặc nhựa. Tấm kết quả được sấy khô và làm nóng bằng cách đun nóng trong lò trong 30 phút ở 110 ° C. Độ dày của lớp thấm khoảng 0,1-0,35 mm cho mục đích phân tích và khoảng 0,5 – 2,0 mm đối với TLC chuẩn bị
Kỹ thuật
Quá trình này tương tự như sắc ký giấy với ưu điểm là chạy nhanh hơn, tách tốt hơn, và sự lựa chọn giữa các pha tĩnh khác nhau. Do sự đơn giản và tốc độ TLC thường được sử dụng để theo dõi các phản ứng hóa học và để phân tích định tính các sản phẩm phản ứng. Các tấm có thể được dán nhãn trước hoặc sau quá trình sắc ký sử dụng một cây bút chì hoặc các dụng cụ khác không can thiệp hoặc phản ứng với quá trình này.
Để chạy tấm sắc ký lớp mỏng, thủ tục sau được thực hiện:
Sử dụng mao mạch, một điểm nhỏ dung dịch có chứa mẫu được áp dụng cho một tấm, cách cạnh dưới khoảng 1,5 cm. Dung môi được cho phép hoàn toàn bay hơi để ngăn không cho nó can thiệp vào các tương tác mẫu với pha động trong bước tiếp theo. Nếu một dung môi không bay hơi được sử dụng để áp dụng mẫu, tấm cần được làm khô trong buồng chân không. Bước này thường được lặp lại để đảm bảo có đủ chất phân tích tại điểm bắt đầu trên tấm để đạt được kết quả rõ ràng. Các mẫu khác nhau có thể được đặt trong một hàng các điểm cùng khoảng cách từ cạnh dưới cùng, mỗi chiếc sẽ di chuyển trong làn đường liền kề của riêng mình từ điểm khởi đầu của nó.
Một lượng nhỏ dung dịch thích hợp (eluent) được đổ vào một cốc thủy tinh hoặc bất kỳ bình chứa trong suốt khác (buồng ngăn) đến độ sâu dưới 1 centimet. Một dải giấy lọc (còn gọi là “wick”) được đưa vào buồng để phần đáy của nó chạm vào dung môi và giấy nằm trên bức tường buồng.
Hộp chứa được đóng lại bằng kính che hoặc bất kỳ nắp khác trong vài phút để cho hơi dung môi tràn lên giấy lọc và làm thấm vào không khí trong buồng. (Không thấm vào buồng sẽ dẫn đến kết quả phân tách và không thể tái tạo).
Sau đó, tấm TLC được đưa vào buồng sao cho (các) vị trí của mẫu không chạm vào bề mặt của chất rửa giải trong buồng và nắp được đóng lại. Dung môi di chuyển tấm lên bằng phép mao mạch, đáp ứng mẫu hỗn hợp và đưa nó lên tấm (elutes mẫu).
Phải tháo tấm ra khỏi buồng trước khi kết thúc phép thử.
Không có sự chậm trễ, phía trước dung môi, mức độ xa nhất của dung môi lên tấm, được đánh dấu.
Tấm được hình dung. Một số tấm được phủ sẵn một chất phosphor như kẽm sulfua, cho phép nhiều hợp chất được hình dung bằng cách sử dụng ánh sáng cực tím; Các đốm đen xuất hiện ở nơi mà các hợp chất chặn ánh sáng tia cực tím không bị va đập. Ngoài ra, tấm có thể được phun hoặc ngâm trong hóa chất sau khi rửa. Các tác nhân hình ảnh khác nhau phản ứng với các đốm để tạo ra kết quả khả quan.