(LCM), còn được gọi là microdissection, laser microdissection (LMD), hoặc laser microdissection (LMD hoặc LAM), là một phương pháp để cô lập các tế bào cụ thể quan tâm từ các vùng cực nhỏ mô / tế bào / sinh vật (phẫu thuật trên một quy mô vi mô với sự trợ giúp của laser).
Nguyên tắc
Phương pháp lấy microdissection chụp bằng laser (LCM) là một phương pháp để mua các tế bào mô tế bào dưới mô hình trực quan nhỏ. Công nghệ LCM có thể thu thập các tế bào mà chúng ta quan tâm trực tiếp hoặc có thể cô lập các tế bào cụ thể bằng cách cắt bỏ các tế bào không mong muốn để tạo ra các quần thể tế bào được làm giàu tinh khiết. Một loạt các ứng dụng hạ lưu tồn tại: DNA genotyping và loss-of-heterozygosity (LOH) phân tích, RNA transcript profiling, tạo ra thư viện cDNA, proteomics khám phá và tín hiệu-pathway profiling. Ở đây chúng tôi cung cấp một mô tả kỹ lưỡng về các kỹ thuật LCM, với sự nhấn mạnh vào lời khuyên và lời khuyên khắc phục sự cố từ người dùng LCM. Tổng thời gian cần thiết để thực hiện quy trình này thường là 1-1,5 giờ. Các mô của con người bao gồm các phụ gia phức tạp của các loại tế bào khác nhau và phân tích có ý nghĩa sinh học của chúng đòi hỏi phải mua sắm các mẫu tinh khiết của các tế bào được quan tâm. Nhiều phương pháp tiếp cận đã được sử dụng trong các nỗ lực để vượt qua khó khăn này, bao gồm một loạt các phương pháp microdissection
Trích xuất
Một laser được ghép vào kính hiển vi và tập trung vào mô trên slide. Bằng cách di chuyển của laser bằng quang hoặc giai đoạn tập trung theo một quỹ đạo được xác định trước bởi người sử dụng. Quỹ đạo này, còn được gọi là phần tử, sau đó được cắt ra và tách ra khỏi các mô lân cận. Sau quá trình cắt, một quá trình khai thác phải tuân theo nếu một quy trình chiết xuất là mong muốn. Các công nghệ gần đây sử dụng microdissection không tiếp xúc.
Có một số cách lấy mô từ kính hiển vi bằng một mẫu mô bệnh học trên đó. Nhấn một bề mặt dính vào mẫu và xé ra. Điều này chiết xuất vùng mong muốn, nhưng cũng có thể loại bỏ các hạt hoặc mô không mong muốn trên bề mặt, bởi vì bề mặt không được chọn lọc. Làm tan màng nhựa vào mẫu và xé ra. Nhiệt được đưa ra, ví dụ bằng laser hồng ngoại hoặc hồng ngoại vào một màng sơn màu nhuộm hấp thụ. Vì điều này phù hợp với mẫu mong muốn trên màng, như với bất kỳ màng nào được đặt gần bề mặt mẫu mô bệnh học, có thể có một số mảnh vụn được chiết xuất. Một nguy cơ khác là nhiệt độ ban đầu: Một số phân tử như DNA, RNA, hoặc protein không cho phép được làm nóng quá nhiều hoặc ở tất cả cho mục đích bị cô lập hoàn toàn là có thể.
Đối với vận tải không tiếp xúc. Có ba cách tiếp cận khác nhau. Vận chuyển bằng trọng lực sử dụng kính hiển vi đứng thẳng (gọi là GAM, kính hiển vi hỗ trợ trọng lực) hoặc vận chuyển bằng máy phóng laser; thế hệ mới nhất sử dụng một công nghệ dựa trên chuyển tiếp chuyển tiếp bằng laser (LIFT). Với việc cắt và chụp, mũ phủ một lớp keo được định vị trực tiếp trên phần mô mỏng (5-8 μm), phần chính nó nằm trên màng mỏng (polyethylene naphtalene). Một IR laser nhẹ nhàng làm nóng chất dính trên nắp hợp nhất nó với mô bên dưới và một tia cực tím cắt qua mô và màng dưới. Các mô màng tế bào bây giờ tuân thủ nắp và các tế bào trên nắp có thể được sử dụng trong các ứng dụng hạ lưu (DNA, RNA, phân tích protein)