Đối với một cột hấp phụ, nhựa cột (pha tĩnh) gồm có các hạt nhỏ. Ngay cả các hạt nhỏ hơn như protein, carbohydrate, ion kim loại, hoặc các hợp chất hóa học khác được liên hợp với các vi sinh vật. Mỗi hạt gắn kết được gắn vào microbead được giả định để ràng buộc với tỉ lệ 1: 1 với mẫu chất tan được gửi qua cột cần phải được tẩy uế hoặc tách ra.
Keq = [CS] / ([C] [S]) trong đó Keq là hằng số cân bằng, [C] và [ S] là nồng độ của phân tử mục tiêu và phân tử gắn kết trên nhựa cột. [CS] là nồng độ của phức hợp phân tử đích bị ràng buộc với nhựa cột.
Sử dụng cơ sở này, có thể sử dụng ba công cụ đẳng hướng khác nhau để mô tả động lực liên kết của phép sắc ký cột: tuyến tính, Langmuir, và Freundlich.
Các isotherm tuyến tính xảy ra khi nồng độ dung môi cần thiết để được tinh chế so với các phân tử gắn kết. Như vậy, sự cân bằng có thể được định nghĩa như sau:
[CS] = Keq[C].
Đối với việc sử dụng quy mô công nghiệp, tổng số các phân tử gắn kết trên hạt nhựa hạt phải được tính toán vì các vị trí không có người ở phải được tính đến. Các isotherm Langmuir và đẳng nhiệt Freundlich hữu ích trong việc mô tả sự cân bằng này. Langmuir Isotherm:
[CS] = (KeqStot [C]) / (1 + Keq [C]), trong đó Stot là tổng số các phân tử gắn kết trên các hạt.
Freundlich Isotherm:
[CS] = Keq [C] 1 / n
Phương pháp đẳng nhiệt Freundlich được sử dụng khi cột có thể liên kết với nhiều mẫu khác nhau trong dung dịch cần được tinh chế. Bởi vì nhiều mẫu khác nhau có hằng số ràng buộc khác nhau cho các hạt, có rất nhiều Keq’s khác nhau. Do đó, đẳng nhiệt Langmuir không phải là một mô hình tốt để ràng buộc trong trường hợp này