Các loại gel
Các loại gel được sử dụng phổ biến nhất là agarose và polyacrylamide gels. Mỗi loại gel rất phù hợp với các loại và kích cỡ khác nhau của chất phân tích. Polyacrylamide gels thường được sử dụng cho protein, và có sức giải quyết rất cao cho các đoạn DNA nhỏ (5-500 bp). Các gel Agarose mặt khác có khả năng phân giải thấp hơn đối với DNA nhưng có khoảng cách ly lớn hơn, và do đó được sử dụng cho các đoạn ADN có kích cỡ thường từ 50 đến 20.000 bp, nhưng có thể giải quyết được trên 6 Mb bằng điện di gel trường xung (PFGE ). Polyacrylamide gel được chạy trong một cấu hình thẳng đứng trong khi agarose gel thường chạy theo chiều ngang trong một chế độ tàu ngầm. Họ cũng khác nhau trong phương pháp đúc của chúng, như agarose bộ nhiệt, trong khi polyacrylamide hình thành trong một phản ứng hóa học trùng hợp.
Agarose
Bài chi tiết: Điện di gel agarose
Agarose gel được làm từ polysaccharide polymer tự nhiên chiết xuất từ rong biển. Agarose gel dễ dàng được bôi và xử lý so với các ma trận khác, bởi vì thiết lập gel là một sự thay đổi vật lý chứ không phải là hóa học. Các mẫu cũng dễ dàng phục hồi. Sau khi thí nghiệm kết thúc, gel kết quả có thể được chứa trong túi nhựa trong tủ lạnh.
Gel Agarose không có kích thước lỗ rụng đồng nhất, nhưng tối ưu cho điện di của các protein lớn hơn 200 kDa. Agarose gel electrophoresis cũng có thể được sử dụng để tách các đoạn DNA từ 50 cặp cơ sở đến nhiều cơ sở dữ liệu (hàng triệu căn), trong đó nhiều nhất đòi hỏi phải có các thiết bị chuyên dụng. Khoảng cách giữa các dải DNA có độ dài khác nhau chịu ảnh hưởng bởi agarose phần trăm trong gel, với tỷ lệ cao hơn đòi hỏi thời gian chạy lâu hơn, đôi khi ngày. Thay vào đó, tỷ lệ agarose agarose cao nên được chạy bằng điện trường xung điện (PFE), hoặc electrophoresis đảo ngược trường.
“Hầu hết các gel agarose được tạo ra từ 0,7% (tách tốt hoặc giải quyết các mảnh ADN 5-10kb lớn) và 2% (chất phân giải tốt cho các phân tử nhỏ 0,2-1kb) được hòa tan trong dung dịch đệm điện di, có thể dùng đến 3% tách các mảnh rất nhỏ xíu nhưng một loại gel polyacrylamide thẳng đứng thích hợp hơn trong trường hợp này Thấp tỷ lệ phần trăm gel rất yếu và có thể vỡ khi bạn cố gắng nhổ chúng lên Thổi phần trăm gel thường giòn và không đều đều 1% nhiều ứng dụng “
Polyacrylamide
Bài chi tiết: Điện di gel polyacrylamide
Điện di gel polyacrylamide (PAGE) được sử dụng để tách các protein có kích thước từ 5 đến 2.000 kDa do kích thước lỗ đồng đều được cung cấp bởi gel polyacrylamide. Kích thước lỗ rỗng được điều chỉnh bằng cách điều chỉnh nồng độ acrylamide và bột bis-acrylamide được sử dụng để tạo gel. Phải cẩn thận khi tạo loại gel này vì acrylamide là một chất độc thần kinh mạnh trong các dạng lỏng và dạng bột.
Các kỹ thuật sắp xếp DNA truyền thống như Maxam-Gilbert hay Sanger đã sử dụng gel polyacrylamide để phân tách các đoạn DNA khác nhau bằng một cặp cơ sở duy nhất có độ dài để có thể đọc được trình tự. Hầu hết các phương pháp tách DNA hiện đại đều sử dụng gel agarose, ngoại trừ những mảnh ADN nhỏ. Nó hiện đang được sử dụng nhiều nhất trong lĩnh vực miễn dịch học và phân tích protein, thường được sử dụng để tách các protein khác nhau hoặc ioforms của cùng một protein thành các dải riêng biệt. Những chất này có thể được chuyển vào một màng nitrocellulose hoặc PVDF để thăm dò với các kháng thể và các dấu hiệu tương ứng, chẳng hạn như ở vết thâm nước.
Thông thường gel giải quyết được tạo thành 6%, 8%, 10%, 12% hoặc 15%. Stacking gel (5%) được đổ trên đầu trang của gel giải quyết và một cái lược gel (mà hình thành giếng và xác định các tuyến đường nơi protein, đệm mẫu và thang sẽ được đặt) được chèn vào. Tỷ lệ phần trăm được lựa chọn phụ thuộc vào kích cỡ của protein mà người ta muốn xác định hoặc thăm dò trong mẫu. Trọng lượng càng nhỏ thì tỷ lệ phần trăm càng cao. Những thay đổi trên hệ thống đệm của gel có thể giúp giải quyết các protein có kích thước rất nhỏ [9].
Tinh bột
Tinh bột khoai tây đã được thủy phân một phần làm cho một môi trường không độc hại khác cho protein điện di. Các chất gel hơi đục hơn acrylamide hoặc agarose. Các protein không biến tính có thể được tách ra theo lượng và kích cỡ. Chúng được hình dung bằng cách sử dụng nhuộm Napthal Black hoặc Amido Black. Các nồng độ tinh bột điển hình là từ 5% đến 10%