Phép sắc ký lỏng là phương pháp tách vật lý, trong đó các thành phần của hỗn hợp lỏng được phân bố giữa hai pha có thể hoà nhập được, tức là, tĩnh và di động. The Practice of LC có thể được chia thành năm loại, nghĩa là, khả năng hấp thụ sắc ký, phân vùng sắc ký, trao đổi ion sắc ký, sắc ký size-trừ, và sắc ký ái lực. Trong số này, các biến thể sử dụng rộng rãi nhất là ngược pha (RP) của kỹ thuật sắc ký chế độ phân vùng, Mà làm cho việc sử dụng một không phân cực (kỵ nước) được nhồi pha tĩnh và pha động cực. Trong các ứng dụng phổ biến, pha động là một hỗn hợp của nước và các dung môi phân cực khác (ví dụ, methanol, isopropanol và acetonitrile), và ma trận văn phòng phẩm được chuẩn bị bằng cách gắn các nhóm alkyl chuỗi dài (ví dụ, n-Octadecyl hoặc C18) để Bề mặt của các hạt silic đường kính 5 μm không đều hoặc hình cầu.
Trong HPLC, điển hình là 20 μl mẫu quan tâm được bơm vào dòng pha di động được phân phối bởi một máy bơm áp suất cao. Giai đoạn di động chứa các chất phân tích thấm qua tầng pha cố định theo một hướng xác định. Các thành phần của hỗn hợp được tách ra tùy thuộc vào ái lực của chúng với các pha di động và tĩnh. Sự phân tách xảy ra sau khi các bước hấp thụ và desorption lặp đi lặp lại xảy ra khi chất lỏng tương tác với giường tĩnh. Dung môi lỏng được phân phối dưới áp suất cao (lên tới 400 bar hoặc 300.000 torr) trong một cột có chứa pha tĩnh. Áp lực cao là cần thiết để đạt được tốc độ dòng chảy liên tục cho các thí nghiệm sắc ký tái tạo. Tùy thuộc vào sự phân chia giữa các giai đoạn di động và tĩnh, các thành phần của mẫu sẽ chảy ra khỏi cột tại các thời điểm khác nhau. Cột này là thành phần quan trọng nhất của hệ thống LC và được thiết kế để chịu được áp suất cao của chất lỏng. Các cột LC thông thường dài 100-300 mm với đường kính ngoài 6,4 mm (1/4 inch) và đường kính bên trong 3,0-4,6 mm. Đối với các ứng dụng liên quan đến LC-MS, chiều dài của cột sắc ký có thể ngắn hơn (30-50 mm) với các hạt đóng gói đường kính 3-5 μm. Ngoài các mô hình thông thường, các cột LC khác là các mô hình hẹp, microbore, microcapillary, và nano-LC. Các cột này có đường kính trong nhỏ hơn, cho phép tách hiệu quả hơn, và xử lý lưu lượng dưới 1 ml / phút (tốc độ dòng truyền thống). Để nâng cao hiệu quả tách và độ phân giải đỉnh, có thể sử dụng sắc ký lỏng siêu hiệu năng (UPLC) thay cho HPLC. Phiên bản này sử dụng cột LC đóng gói với các hạt silica nhỏ (đường kính ~ 1,7 um) và đòi hỏi áp suất vận hành cao hơn trong khoảng từ 310.000 đến 775.000 torr (6000 psi đến 15000