Sắc ký
Chromatography loại trừ kích thước (SEC), còn gọi là phép sắc ký thẩm thấu gel hoặc sắc ký lọc gel, phân tách các hạt dựa trên kích thước phân tử (thực ra bởi bán kính Stokes của hạt). Nói chung chất sắc ký có độ phân giải thấp và do đó nó thường được dành riêng cho bước cuối cùng “đánh bóng” của quá trình tinh chế. Nó cũng hữu ích để xác định cấu trúc bậc ba và cấu trúc bậc bốn của các protein tinh chế. SEC được sử dụng chủ yếu để phân tích các phân tử lớn như protein hoặc polyme. SEC hoạt động bằng cách giữ các phân tử nhỏ hơn này trong các lỗ của một hạt. Các phân tử lớn hơn đơn giản đi qua các lỗ nhỏ vì chúng quá lớn để đi vào các lỗ. Các phân tử lớn hơn do đó chảy qua cột nhanh hơn các phân tử nhỏ hơn, nghĩa là phân tử nhỏ hơn, thời gian lưu giữ càng lâu.
Kỹ thuật này được sử dụng rộng rãi để xác định trọng lượng phân tử của polysaccharides. SEC là kỹ thuật chính thức (gợi ý bởi dược liệu của Châu Âu) để so sánh trọng lượng phân tử của các loại heparin có trọng lượng phân tử thấp thương mại khác nhau.
Sắc ký trao đổi ion
Trong trao đổi ion sắc ký (IC), duy trì được dựa trên sự hấp dẫn giữa các ion chất tan và các trang web tính ràng buộc với pha tĩnh. ion chất tan của cùng tội trong những địa điểm tính trên cột được loại trừ khỏi ràng buộc, trong khi các ion chất tan của phí đối diện của các trang web tính của cột được giữ lại trên cột. ion chất tan que được giữ lại trên cột có thể được tách rửa khỏi cột bằng cách thay đổi các điều kiện dung môi (ví dụ Tăng hiệu lực ion của hệ thống dung môi bằng cách tăng nồng độ muối của các giải pháp, Tăng nhiệt độ cột, thay đổi độ pH của dung môi, Vv …).
Các loại trao đổi ion bao gồm:
Nhựa Polystyrene – Chúng cho phép liên kết chéo tăng tính ổn định của dây chuyền. Liên kết chéo cao hơn làm giảm sự biến dạng, làm tăng thời gian cân bằng và cuối cùng cải thiện tính chọn lọc.
Cellulose và trao đổi ion dextran (gel) – Những sở hữu kích thước lỗ chân lông lớn và mật độ phí thấp làm cho chúng phù hợp để tách protein.
Thủy tinh có lỗ điều khiển hoặc silica xốp
Nói chung, bộ trao đổi ion ủng hộ sự ràng buộc của ion với phí cao hơn và bán kính nhỏ hơn.
Sự gia tăng ion phản ứng (đối với các nhóm chức trong nhựa) làm giảm thời gian lưu giữ. Sự giảm pH mạch máu thời gian lưu giữ trong việc trao đổi cation trong khi một Tăng pH mạch máu thời gian lưu giữ trong trao đổi anion. Bằng cách hạ thấp pH của dung môi trong một cột trao đổi cation, ví dụ, các ion hydro hơn có sẵn để cạnh tranh cho vị trí anion trên pha tĩnh, tẩy rửa các cation Qua đó một cách yếu ớt bị ràng buộc.
Hình thức này của sắc ký được sử dụng rộng rãi trong các ứng dụng sau: lọc nước, preconcentration của các thành phần vi lượng, ligand-sắc ký trao đổi, trao đổi ion sắc ký của các protein, pH cao anion-sắc ký trao đổi của carbohydrates và oligosaccharides, và những người khác.