Phương pháp sắc ký lỏng tương tác hydrophilic (hoặc sắc ký lỏng tương tác hydrophilic, HILIC) là một biến thể của sắc ký lỏng bình thường pha trộn một phần với các ứng dụng sắc ký khác như sắc ký ion và sắc ký lỏng pha đảo. HILIC sử dụng các pha tĩnh điện hydrophilic với eluent loại đảo pha. Tên này được đề xuất bởi Tiến sĩ Andrew Alpert trong bài báo năm 1990 về chủ đề này. Trong bài báo này, chúng tôi đã mô tả cơ chế sắc ký cho nó như một phép sắc ký phân tử chất lỏng và phân tích theo thứ tự tăng cực, một kết luận được hỗ trợ bởi một đánh giá và đánh giá lại các dữ liệu đã công bố.
Bề mặt
Bất kỳ bề mặt sắc ký cực có thể được sử dụng để tách HILIC. Ngay cả các silic ngoại bào không phân cực đã được sử dụng với thành phần dung môi hữu cơ rất cao, khi silica được sử dụng cho môi trường sắc ký đặc biệt cực kỳ. Với ngoại lệ đó, các giai đoạn HILIC có thể được phân nhóm thành năm loại bề mặt cực hoặc cực trung hòa:
- silanol silic silanol đơn giản hoặc pha liên kết diol
- amino hoặc các pha ngoại quan anion
- amide pha ngoại quan
- pha cation dính
- các giai đoạn liên kết lưỡng cực
Giai đoạn di động
Một pha điện di động điển hình cho sắc ký HILIC bao gồm acetonitrile (“MeCN”) với một lượng nước nhỏ. Tuy nhiên, bất kỳ dung môi aprotic nào có thể trộn với nước (ví dụ, THF hoặc dioxane) có thể được sử dụng. Rượu cũng có thể được sử dụng, tuy nhiên, nồng độ của chúng phải cao hơn để đạt được mức độ giữ lại tương tự đối với chất phân tích liên quan đến sự kết hợp nước dung môi không aprotic. Xem thêm Chromatography Giai đoạn Bình thường Bình thường
Người ta thường tin rằng trong HILIC, pha di động tạo thành một lớp giàu nước trên bề mặt của pha tĩnh ở cực pha lỏng di động, tạo ra một hệ thống chiết lỏng / lỏng. Chất phân tích được phân bố giữa hai lớp này. Tuy nhiên, HILIC không chỉ phân vùng và tận dụng sự tương tác giữa các phân cực trung lập cũng như các cơ chế điện tĩnh yếu trong các điều kiện dung môi hữu cơ cao được sử dụng để duy trì. Điều này phân biệt HILIC như một cơ chế riêng biệt từ sắc ký trao đổi ion. Các hợp chất cực hơn sẽ có sự tương tác mạnh hơn với lớp dung dịch tĩnh tại đây so với các hợp chất cực phân cực. Như vậy, sự phân chia dựa trên phân cực của một hợp chất và mức solvation diễn ra.
Phụ gia
Các chất phụ gia ion, như ammonium acetate và ammonium formate, thường được sử dụng để kiểm soát độ pH và điện thế di động. Trong HILIC, chúng cũng đóng góp vào phân cực của chất phân tích, dẫn đến sự thay đổi khác biệt trong việc duy trì. Đối với các chất phân cực cực (ví dụ, thuốc kháng sinh aminoglycosid (gentamicin) hoặc Adenosine triphosphate), cần phải có nồng độ đệm cao hơn (khoảng 100m) để đảm bảo rằng chất phân tích sẽ ở dạng ion đơn. Nếu không, hình dạng đỉnh bất đối xứng, sắc ký và / hoặc sự phục hồi kém từ pha tĩnh sẽ được quan sát thấy. Đối với việc phân tách các chất phân cực trung lập (ví dụ như carbohydrate), không cần đệm.
Việc sử dụng các muối khác như natri perchlorate 100-300mM, tan trong hỗn hợp dung môi hữu cơ cao (khoảng 70% -90% acetonitrile), có thể được sử dụng để tăng pha cực để có hiệu lực rửa giải. Những muối này không dễ bay hơi, vì vậy kỹ thuật này ít hữu ích hơn với một quang phổ khối như là máy phát hiện. Thông thường một gradient (để tăng lượng nước) là đủ để thúc đẩy elution.
Tất cả các ion phân rã vào pha tĩnh ở một mức độ nào đó, do đó cần thỉnh thoảng “rửa” với nước để đảm bảo pha tĩnh.