Các ứng dụng
Chế độ tách HILIC được sử dụng rộng rãi đối với một số phân tử sinh học, các phân tử hữu cơ và một số phân tử vô cơ do sự khác biệt về phân cực. Tiện ích của nó đã tăng lên do việc chuẩn bị mẫu đơn giản cho các mẫu sinh học, khi phân tích các chất chuyển hóa, vì quá trình trao đổi chất nói chung kết quả trong việc bổ sung các nhóm cực để tăng cường loại bỏ khỏi mô tế bào. Kỹ thuật tách này đặc biệt thích hợp cho phân tích glycosyl hóa và đảm bảo chất lượng glycoprotein và glycoforms trong các sản phẩm y học sinh học . Đối với việc phát hiện các hợp chất phân cực với việc sử dụng phổ ion hóa có khối lượng electrospray như một máy dò HILIC sắc ký có thể cung cấp một Tăng gấp mười trong sự nhạy cảm trên sắc ký đảo ngược pha vì các dung môi hữu cơ là nhiều biến động.
Lựa chọn pH
Với các hóa chất bề mặt có tính ion thấp, sự lựa chọn pH có thể ảnh hưởng đến tính chất ion của hóa học cột. Điều chỉnh đúng, độ pH có thể được thiết lập để làm giảm tính chọn lọc đối với các nhóm chức năng với cùng mức phí như cột, hoặc tăng cường độ cho các nhóm chức năng tích điện dương. Tương tự, sự lựa chọn pH ảnh hưởng đến cực của các chất tan. Tuy nhiên, chất hóa học bề mặt Đó là cột được mạnh ion, và Do đó kháng với các giá trị pH trong tầm trung trên thang đo pH (pH 3,5-8,5) Những Separations sẽ phản ánh sự phân cực của chất phân tích một mình, và Như vậy có thể dễ hiểu khi tiến hành các phương pháp phát triển.
ERLIC
Năm 2008, Alpert đặt ra thuật ngữ, ERLIC (lực đẩy tĩnh điện hydrophilic sắc ký tương tác), là HILIC Separations hợp hóa học bề mặt cột ion được sử dụng để đẩy lùi các nhóm cực ion phổ biến trên một chất phân tích hoặc Trong bộ chất phân tích, để thuận lợi cho tách biệt bởi các nhóm cực còn lại. Hiệu ứng điện có một mức độ tiềm năng hóa học mạnh hơn các hiệu ứng cực trung tính. Điều này cho phép giảm thiểu ảnh hưởng của một nhóm ion thông thường trong một tập các phân tử phân tử; hoặc để giảm mức độ giữ lại từ các nhóm chức năng cực hơn, thậm chí cho phép tách biệt đẳng cấp thay vì một gradient trong một số trường hợp. ấn phẩm tiếp theo của mình mô tả thêm các hiệu ứng định hướng .Những người khác cũng đã được gọi là giai đoạn bình thường ion cặp hoặc e-HILIC, phản ánh cơ chế duy trì đặc biệt nhạy cảm với phần ion của chất phân tích, hoặc là hấp dẫn hay thuần phong mỹ tục. ERLIC (eHILIC) Separations không cần phải isocratic, nhưng hiệu quả ròng là giảm sự hấp dẫn của các nhóm cực Riêng mạnh mẽ, sau đó đòi hỏi phải có điều kiện rửa giải ít mạnh mẽ, và sự tương tác nâng cao của cực còn lại (đối diện sạc ion, hoặc không -ic) các nhóm chức năng của (các) chất phân tích.
Cationic eHILIC
Ví dụ, người ta có thể sử dụng các cation trao đổi (tích điện âm) bề mặt hóa học là ERLIC Separations để giảm ảnh hưởng đến lưu giữ các anion (điện tích âm) nhóm (nhóm phosphate của nucleotide hoặc phosphonyl Hỗn hợp kháng sinh, hoặc các nhóm axit sialic của carbohydrate sửa đổi) để cho phép phân tách dựa trên các nhóm chức năng cơ bản và / hoặc trung lập của các phân tử này. Sửa đổi tính phân cực của một nhóm ion yếu (ví dụ carboxyl) trên bề mặt được thực hiện dễ dàng bằng cách điều chỉnh pH tới trong hai đơn vị độ pH của pKa của nhóm đó. Đối với các nhóm chức năng ion mạnh của bề mặt (tức là sunfat hoặc phosphat), người ta có thể sử dụng số lượng chất đệm thấp hơn do đó lượng dư còn lại không hoàn toàn được ghép cặp. Một ví dụ về điều này sẽ là việc sử dụng một 12,5 mm (chứ không phải là khuyến cáo> 20 mM đệm), pH 9.2 pha động trên polyme, zwitterionic, bề mặt betain-sulfonate để tách hỗn hợp kháng sinh phosphonyl (mỗi có chứa một nhóm phosphate). Điều này làm tăng ảnh hưởng của các nhóm chức năng của nhóm sulfonic acid cột của hóa học bề mặt của nó lên, giảm nhẹ (do pH), amin bậc bốn. Phù hợp với điều này, những phân tích này sẽ cho thấy sự giảm sút trên cột loại bỏ sớm hơn, và với lượng dung môi hữu cơ cao hơn so với khi sử dụng một bề mặt HILIC cực trung hòa. Điều này cũng làm tăng độ nhạy phát hiện của chúng bằng phổ khối lượng ion âm.
Anionic eHILIC
Bằng cách tương tự như trên, người ta có thể sử dụng một cuộc trao đổi anion bề mặt (tích điện dương) hóa cột để giảm ảnh hưởng đến lưu giữ các cation (tích điện dương) nhóm chức là tập hợp các chất phân tích, chẳng hạn như khi cô lập một cách chọn lọc các peptide phosphoryl hóa hoặc phân tử polysaccharide sulfate . Sử dụng độ pH giữa 1 và 2 đơn vị pH sẽ giảm cực của hai trong số ba oxy ionizable của nhóm phosphate, và sẽ cho phép giải hấp dễ dàng Như vậy từ hóa học bề mặt (tích điện trái dấu). Nó cũng sẽ làm giảm ảnh hưởng của carboxyls tích điện âm trong các chất phân tích, vì chúng sẽ được proton hóa ở mức thấp này ở giá trị pH và do đó đóng góp ít phân cực tổng thể hơn cho phân tử.