Protein
Bài chi tiết: Gel điện di của protein
Phép autoradiography SDS-PAGE – Các protein được chỉ định có mặt ở các nồng độ khác nhau trong hai mẫu.
Protein, không giống như axit nucleic, có thể có các điện tích khác nhau và hình dạng phức tạp, do đó chúng không thể di chuyển vào gel polyacrylamide ở các tỷ lệ tương tự, hoặc ở tất cả khi đặt một âm tính vào dương tính EMF trên mẫu. Protein do đó thường bị biến tính khi có chất tẩy rửa như natri dodecyl sulfat (SDS) mà phủ các protein với một điện tích âm. Nói chung, lượng SDS bị ràng buộc là tương đối so với kích cỡ của protein (thường là 1,4g SDS trên một gram protein), do đó các protein bị biến tính kết quả có một điện tích âm chung, và tất cả các protein đều có tỉ lệ tương tự như khối lượng. Vì các protein biến tính hoạt động như các thanh dài thay vì có hình dạng phức tạp bậc ba, tỷ lệ mà các protein tráng SDS tạo ra di chuyển trong gel chỉ liên quan đến kích thước của nó và không phải là điện tích hoặc hình dạng của nó.
Protein thường được phân tích bằng phương pháp điện di electrophoresis của gel natri acicryđam natri dodecyl sulfate (SDS-PAGE), bằng điện di gel tự nhiên, bằng điện di gel chuẩn hóa (QPNC-PAGE) hoặc bằng điện di 2-D.
Đặc tính thông qua sự tương tác của ligand có thể được thực hiện bằng electroblotting hoặc bằng điện di affinity trong agarose hoặc bằng điện di mao mạch như để ước lượng các hằng số liên kết và xác định các tính năng cấu trúc như nội dung glycan thông qua sự ràng buộc lectin.
Lịch sử
Ảnh chụp động điện thể hiện 4 lần chạy PAGE của protein cadmium có mật độ phân tử cao được làm mới bằng sắc ký học (≈ 200 ku) theo chức năng thời gian trùng hợp của gel (4% T, 2,67% C).
1930s – báo cáo đầu tiên về việc sử dụng sucrose cho điện di gel
1955 – sự ra đời của tinh bột gel, trung bình tách (Smithies)
1959 – sự ra đời của acrylamide gels; điện di đĩa (Ornstein và Davis); kiểm soát chính xác các thông số như kích thước lỗ chân lông và độ ổn định; và (Raymond và Weintraub)
1966 – lần đầu tiên sử dụng gel agar
1969 – Giới thiệu các tác nhân gây ô nhiễm đặc biệt là phân tách các phân tử protein dưới dạng SDS (Weber và Osborn)
1970 – Laemmli tách 28 thành phần của phage T4 bằng cách sử dụng gel xếp chồng và SDS
1972 – gel agarose với vết bẩn ethidium bromide
1975 – gel 2 chiều (O’Farrell); isoelectric tập trung sau đó SDS gel electrophoresis
1977 – gel định hình
1983 – điện di gel trường xung cho phép tách các phân tử ADN lớn
1983 – giới thiệu điện di mao mạch
2004 – thời gian trùng hợp của gel acrylamide đã được chuẩn hóa cho phép phân tách các protein tự nhiên và dự đoán được (Kastenholz)
Một cuốn sách về điện di năm 1959 của Milan Bier trích dẫn các tài liệu tham khảo từ những năm 1800.
Tuy nhiên, Oliver Smithies đã đóng góp đáng kể. Bier tuyên bố: “Phương pháp của Smithies … đang tìm kiếm ứng dụng rộng rãi vì sức mạnh tách biệt độc nhất của nó.” Trong bối cảnh, Bier rõ ràng hàm ý rằng phương pháp của Smithies là một sự cải tiến.