Là một phương pháp sắc ký, trong đó các phân tử trong dung dịch được phân tách theo kích cỡ của chúng, và trong một số trường hợp trọng lượng phân tử. Nó thường được áp dụng cho các phân tử lớn hoặc phức hợp vĩ mô như protein và polyme công nghiệp. Thông thường, khi một dung dịch nước được sử dụng để vận chuyển mẫu qua cột, kỹ thuật này được gọi là sắc ký lọc gel, so với tên gel chromatography thẩm thấu được sử dụng khi một dung môi hữu cơ được sử dụng như một pha di động. SEC là một phương pháp đặc tính polyme được sử dụng rộng rãi vì nó có khả năng cung cấp kết quả phân bố tốt phân tử mol (Mw) cho polyme.
Các ứng dụng
Các ứng dụng chính của sắc ký lọc gel là phân đoạn protein và các polyme hòa tan trong nước khác, trong khi phương pháp sắc ký gel thẩm thấu được sử dụng để phân tích sự phân bố trọng lượng phân tử của các polyme hòa tan hữu cơ. Một kỹ thuật không nên nhầm lẫn với điện di gel, nơi mà một điện trường được sử dụng để “kéo” hoặc “đẩy” các phân tử qua gel phụ thuộc vào điện tích của chúng.
Ưu điểm
Những lợi thế của phương pháp này bao gồm tách tốt của các phân tử lớn từ các phân tử nhỏ với khối lượng tối thiểu của rửa giải, và Đó Nhiều giải pháp có thể được áp dụng mà không can thiệp vào quá trình lọc, tất cả trong khi vẫn giữ hoạt tính sinh học của các hạt để tách . Kỹ thuật nói chung kết hợp với các chất khác phân tách các phân tử theo các đặc tính khác như độ chua, tính cơ bản, tính tích điện và ái lực đối với một số hợp chất nhất định. Với sắc ký loại trừ kích thước, có những khoảng thời gian tách ngắn và được xác định rõ ràng và các dải hẹp, dẫn đến độ nhạy tốt. Cũng không có mất mẫu vì các chất tan không tương tác với pha tĩnh.
Một ưu điểm khác của phương pháp thực nghiệm này là trong một số trường hợp, có thể xác định được trọng lượng phân tử gần đúng của một hợp chất. Hình dạng và kích thước của hợp chất (eluent) xác định hợp chất tương tác với gel (pha tĩnh). Để xác định trọng lượng phân tử xấp xỉ, khối lượng rửa giải các hợp chất với trọng lượng tương ứng phân tử của họ được Thu And Then cốt truyện của “KAV” so với “log (Mw)” được thực hiện, nơi KAV = (Ve-Võ) / (Vt-Võ) và Mw là khối phân tử. Cốt truyện này hoạt động như một đường cong hiệu chuẩn, được sử dụng để ước lượng trọng lượng phân tử hợp chất mong muốn. Thành phần Ve tượng trưng cho thể tích mà ở đó các phân tử trung gian elute như các phân tử có một phần truy cập vào các hạt của cột. Ngoài ra, Vt là tổng của tổng khối lượng giữa các hạt và thể tích trong các hạt. Thành phần Vo biểu diễn thể tích mà ở đó các phân tử lớn hơn elute, elute vào đầu. Nhược điểm là, ví dụ, chỉ có một số lượng hạn chế băng tần có thể được điều chỉnh bởi vì khoảng thời gian của sắc ký đồ ngắn, và nói chung, phải có sự khác biệt 10% về khối lượng phân tử để có độ phân giải tốt