Phép sắc ký cột trong hóa học là một phương pháp được sử dụng để tinh chế các hợp chất hóa học riêng lẻ từ các hỗn hợp của các hợp chất. Nó thường được sử dụng cho các ứng dụng chuẩn trên quy mô từ microgram đến kilogram. Ưu điểm chính của sắc ký cột là chi phí và khả năng sử dụng tương đối thấp của pha tĩnh trong quá trình này. Loại thứ hai này ngăn ngừa ô nhiễm chéo và sự suy thoái pha tĩnh do tái chế.
Các sắc ký tiền chuẩn chuẩn bị cổ điển là một ống thủy tinh có đường kính từ 5 mm đến 50 mm và chiều cao 5 cm đến 1 mét với một vòi nước và một số loại bộ lọc (một chai thủy tinh hoặc plug len thủy tinh) để ngăn ngừa sự mất mát Pha tĩnh) ở phía dưới. Hai phương pháp thường được sử dụng để chuẩn bị một cột: phương pháp khô và phương pháp ướt.
Đối với phương pháp khô, cột đầu tiên được lấp đầy bằng bột giai đoạn tĩnh, sau đó thêm vào giai đoạn di động, được rửa qua cột cho đến khi nó được làm ướt hoàn toàn, và từ điểm này không bao giờ được chạy khô.
Đối với phương pháp ướt, một hỗn hợp được chuẩn bị từ chất làm nguội với bột pha tĩnh và sau đó cẩn thận đổ vào cột. Phải cẩn thận để tránh bong bóng khí. Một giải pháp của vật liệu hữu cơ được pipet ở phía trên của pha tĩnh. Lớp này thường được phủ một lớp cát hoặc bông nhỏ để bảo vệ hình dạng của lớp hữu cơ từ vận tốc của chất rửa giải mới được thêm vào. Eluent từ từ đi qua cột để tiến lên vật liệu hữu cơ. Thông thường một bình chứa hình eluent hình cầu hoặc một phễu lọc tách đầy và ngăn cách được đặt lên trên cùng của cột.
Các thành phần riêng biệt được giữ lại ở giai đoạn cố định khác nhau và tách biệt nhau trong khi chúng đang chạy ở các tốc độ khác nhau thông qua cột với chất rửa giải. Vào cuối của cột họ elute một tại một thời điểm. Trong suốt quá trình sắc ký, chất rửa giải được thu thập trong một số phân số. Các phân số có thể được thu thập tự động bằng các bộ phận thu gom. Năng suất sắc ký có thể tăng lên bằng cách chạy từng cột một lần. Trong trường hợp này, nhiều nhà sưu tập dòng được sử dụng. Thành phần của dòng chảy eluent có thể được theo dõi và mỗi phân số được phân tích cho các hợp chất hòa tan, ví dụ bằng sắc ký phân tích, phổ hấp thụ tia cực tím, hoặc huỳnh quang. Các hợp chất màu (hoặc các hợp chất huỳnh quang với sự trợ giúp của đèn UV) có thể được nhìn xuyên qua bức tường thủy tinh như các dải chuyển động