Pha tĩnh hoặc chất hấp phụ trong sắc ký cột là chất rắn. Giai đoạn cố định phổ biến nhất đối với sắc ký cột là silica gel, alumin nhôm kế tiếp phổ biến nhất. Bột cellulose thường được sử dụng trong quá khứ. Cũng có thể là sắc ký trao đổi ion, sắc ký đảo pha (RP), phép sắc ký affinity hoặc sự hấp phụ của lớp nở (EBA). Các giai đoạn tĩnh điện thường là bột mịn hoặc gel và / hoặc là microporous cho bề mặt gia tăng, mặc dù trong EBA một giường fluidized được sử dụng. Có một tỷ lệ quan trọng giữa trọng lượng pha tĩnh và trọng lượng khô của hỗn hợp analte có thể được áp dụng cho cột. Đối với sắc ký cột silica, tỷ lệ này nằm trong khoảng 20: 1 đến 100: 1, tùy thuộc vào mức độ gần nhau của các thành phần.
Giai đoạn di động (eluent)
Giai đoạn di động hoặc chất rửa giải là dung môi tinh khiết hoặc hỗn hợp các dung môi khác nhau. Nó được chọn để hệ số lưu giữ của hợp chất quan tâm là khoảng 0,2 đến 0,3 để giảm thiểu thời gian và lượng chất rửa giải để chạy sắc ký. Chất rửa giải cũng đã được chọn để các hợp chất khác nhau có thể được tách ra một cách hiệu quả. Chất rửa giải được tối ưu hóa ở các thử nghiệm quy mô nhỏ, thường sử dụng sắc ký lớp mỏng (TLC) với cùng một giai đoạn tĩnh.
Có một tốc độ dòng chảy tối ưu Đối với mỗi tách cụ thể. Tốc độ dòng chảy nhanh hơn của chất rửa giải giảm thiểu thời gian cần thiết để chạy cột và do đó giảm thiểu sự khuếch tán, dẫn đến sự tách biệt tốt hơn. Tuy nhiên, tốc độ dòng chảy tối đa bị giới hạn bởi vì cần thời gian để chất phân tích cân bằng giữa giai đoạn tĩnh và giai đoạn di động, xem phương trình của Van Deemter. Một cột thí nghiệm đơn giản chạy bằng dòng chảy của trọng lực. Tốc độ dòng chảy của cột như vậy có thể tăng lên bằng cách kéo dài cột lọc eluent tươi lên phía trên đầu pha tĩnh hoặc giảm bằng các điều khiển vòi nước. Tốc độ dòng chảy nhanh hơn có thể đạt được bằng cách sử dụng máy bơm hoặc bằng cách sử dụng khí nén (ví dụ như không khí, nitơ, hoặc argon) để đẩy dung môi qua cột (phương pháp sắc ký cột)
Kích thước hạt của pha tĩnh thường là tốt hơn trong phép sắc ký cột flash so với sắc ký cột trọng lực. Ví dụ, một trong những lưới silica gel được sử dụng rộng rãi nhất trong các kỹ thuật cũ là lưới 230-400 – (. 63-200 um) (40 63 pm), trong khi kỹ thuật Sau thường đòi hỏi lưới 70-230 Silica gel
Bảng tính hỗ trợ sự phát triển thành công của các cột flash đã được phát triển. Bảng tính ước lượng thể tích lưu giữ và khối lượng của các chất phân tích, số phân số dự kiến chứa từng chất phân tích, và độ phân giải giữa các đỉnh liền kề. Thông tin này cho phép người sử dụng lựa chọn các tham số tối ưu cho việc phân tách quy mô chuẩn trước khi bản thân cột flash được thực hiện.