Chất sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), là một kỹ thuật trong hóa học phân tích được sử dụng để tách, xác định và định lượng từng thành phần trong hỗn hợp. Nó dựa vào máy bơm để truyền qua chất lỏng lỏng có chứa chất kết tủa mẫu qua một cột chứa đầy chất hấp thụ rắn. Mỗi thành phần trong mẫu tương tác hơi khác với vật liệu hấp phụ, tạo ra các tốc độ dòng chảy khác nhau cho các thành phần khác nhau và dẫn đến việc tách các thành phần khi chúng chảy ra ngoài cột.
HPLC đã được sử dụng cho quá trình sản xuất (ví dụ trong quá trình sản xuất dược phẩm và các sản phẩm sinh học), hợp pháp (ví dụ phát hiện thuốc tăng cường hiệu năng trong nước tiểu), nghiên cứu (ví dụ tách các thành phần của một mẫu sinh học hoặc các hóa chất tổng hợp tương tự nhau ), Và y tế (ví dụ như phát hiện mức vitamin D trong huyết thanh huyết thanh).
Chromatography có thể được mô tả như là một quá trình chuyển giao khối lượng liên quan đến hấp phụ. HPLC dựa vào các máy bơm để truyền chất lỏng áp suất và một hỗn hợp mẫu qua một cột chứa đầy chất hấp phụ, dẫn đến việc tách các thành phần mẫu. Thành phần hoạt tính của cột, chất hấp phụ, thường là hạt vật liệu dạng hạt tạo thành các hạt rắn (ví dụ silic, polyme, vv), có kích thước từ 2 đến 50 μm. Các thành phần của mẫu được tách ra từ nhau do mức độ tương tác khác nhau của chúng với các hạt hấp phụ. Chất lỏng áp lực thường là hỗn hợp các dung môi (ví dụ như nước, acetonitrile và / hoặc methanol) và được gọi là “pha động”. Thành phần và nhiệt độ của nó đóng một vai trò chính trong quá trình tách bằng cách ảnh hưởng đến các tương tác diễn ra giữa các thành phần mẫu và chất hấp phụ. Những tương tác này có tính chất vật lý, chẳng hạn như k hydro nước (phân tán), lưỡng cực lưỡng cực và ionic, thường là sự kết hợp.
HPLC được phân biệt với sắc ký lỏng truyền thống (“áp suất thấp”) vì áp suất hoạt động cao hơn đáng kể (50-350 thanh), trong khi phép sắc ký lỏng thông thường dựa vào lực hấp dẫn để vượt qua pha động qua cột. Do kích thước mẫu nhỏ trong HPLC phân tích, kích thước cột điển hình có đường kính từ 2,1-4,6 mm và chiều dài 30-250 mm. Ngoài ra các cột HPLC được làm bằng các hạt hấp thụ nhỏ hơn (2-50 μm ở kích thước hạt trung bình). Điều này cho phép giải quyết tốt hơn HPLC (khả năng phân biệt giữa các hợp chất) khi tách hỗn hợp, làm cho nó trở thành một kỹ thuật sắc ký phổ biến.
Các sơ đồ mạch của một công cụ HPLC thường bao gồm một máy khử khí, bộ lấy mẫu, máy bơm và máy dò. Bộ lấy mẫu đưa hỗn hợp mẫu vào dòng pha di động mang nó vào cột. Máy bơm cung cấp dòng chảy và thành phần mong muốn của pha động qua cột. Máy phát hiện ra một tín hiệu tỷ lệ với số lượng thành phần mẫu xuất hiện từ cột, do đó cho phép phân tích định lượng các thành phần mẫu. Bộ vi xử lý số và phần mềm người dùng kiểm soát công cụ HPLC và phân tích dữ liệu. Một số mô hình máy bơm cơ học trong dụng cụ HPLC có thể trộn nhiều dung môi với nhau theo tỷ lệ thay đổi theo thời gian, tạo ra một gradient pha chế trong pha động. Các máy dò khác nhau được sử dụng phổ biến, như UV / Vis, mảng photodiode (PDA) hoặc dựa trên quang phổ khối. Hầu hết các máy móc của HPLC đều có một lò nung cột cho phép điều chỉnh nhiệt độ tại đó việc phân chia được thực hiện.